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大鼠羊水入血后肺病理变化的研究

来源:《中华医学实践杂志》 作者:胡国英, 崔 玲周学武 2008-6-30

摘要: 【摘要】 目的 观察大鼠羊水入血后肺病理的变化。方法 精选雌性Wistar大鼠30只于妊娠20天制作羊水栓塞模型。根据注入液体性质不同随机分为对照组(10只)、羊水组(10只)、胎粪液组(10只)。实验后取大鼠左肺行HE染色光镜下观察,右肺行MPO检查。...


【摘要】  目的 观察大鼠羊水入血后肺病理的变化。方法 精选雌性Wistar大鼠30只于妊娠20天制作羊水栓塞模型。根据注入液体性质不同随机分为对照组(10只)、羊水组(10只)、胎粪液组(10只)。对照组除注入生理盐水外,皆同其余组。实验后取大鼠左肺行HE染色光镜下观察,右肺行MPO检查。结果 实验组肺组织可见大量炎性细胞浸润,包括白细胞(主要为中性粒细胞)、巨噬细胞及少量淋巴细胞;MPO含量明显升高,差异有显著性(P<0.01)。结论 大鼠羊水入血后可引起中性粒细胞、巨噬细胞浸润及一系列病理变化,由此引起肺损伤及临床症状。

【关键词】  羊水栓塞; 肺损伤; 大鼠

    The study of the pulmonary pathological changes in amniotic fluid embolism after rats laboring 

    HU Guo-ying,CUI Ling,ZHOU Xue-wu. Department of Obstetrics and Gynecology, The Daqing Oil    Hospital, Daqing 163453,China

    【Abstract】  Objective  To evaluate the pulmonary pathological changes in amniotic fluid embolism after laboring in rats. Methods  Strictly selected 30 Wistar rats(late pregnancy) and randomly divided into the control group, amniotic group, meconium group. The procedure for control group was exactly the same as the experimental group except injecting NS.After the experiment, the left lung of the rat was perfused with 10% formalin,H.E , the right lung of the rat was taken for the activity of MPO examination. Results   There are a lot of infiltration of neutrophil and macrophage in pulmonary tissue of experimental group. MPO was significantly higher in experimental group.(P<0.01). Conclusion  These results suggest that lots of infiltration of neutrophil and macrophage in pulmonary tissue has an important role in the pathophysiology of the disease.

    【Key words】  amniotic fluid embolism(AFE); pulmonary injury;rat

    羊水栓塞(amniotic fluid embolism,AFE)是产科极为罕见的一种急症,羊水进入母体血循环后继发引起患者肺血管痉挛、休克及DIC为先导的多器官功能衰竭综合征。发生迅速、凶险,病理生理机制复杂。近年,肺的病理变化引起关注[1]。笔者检测了注入不同性状羊水后大鼠肺的病理改变,探讨肺损伤在AFE中的作用。结果报告如下。

    1  材料与方法

    1.1  实验动物及分组  Wistar妊娠晚期大鼠30只,体重在230~350g之间,胎龄19~21天,由中国医科大学第二临床学院实验动物中心提供。根据注入液体的性质不同随机分为3组:对照组(生理盐水)10只,羊水组10只,胎粪液组10只。

    1.2  大鼠羊水收集方法  术前12h禁食,饮水随意。按0.35mg/100g从腹腔注入10%水合氯醛麻醉。将孕鼠置于鼠板上,固定头部和四肢,备皮,取下腹正中切口3cm,行子宫次全切除术,关腹。然后抽取羊膜腔内的羊水。

    1.3  胎粪液的制备  切开胎鼠腹壁,取下胎鼠大肠,轻轻挤压出胎粪或用原羊水肠腔冲洗液,配制成羊水混有胎粪的胎粪液。

    1.4  模型制备  大鼠行子宫次全切除术,关腹。分离右颈外静脉和左颈总动脉,左颈总动脉插管并接通三通管连接于二道生理记录仪连续监测MAP;右颈外静脉接通三通管,将制备好的注射液以2.5ml/kg的剂量从其注入。60min后由右颈外静脉注入10%KCl 5ml 处死动物。剪开胸、腹腔,取左肺、右肾、心、肝、肠道组织适量行组织形态学观察,右肺放入液氮中备用。

    1.5  主要设备和试剂  血压监测仪(Siemens),培养箱,低温超速离心机 (美国DU PONT-SORVALL SUPER-T21型),匀浆仪(Heidolph),7230型分光光度计。

    1.6  检测方法 

    1.6.1  MPO测定  将手术切除的右肺从液氮内随机分批取出,以生理盐水冲洗器官表面的血液,用滤纸沾干,称重。将样品融化后超声粉碎细胞成分(30s,3次),60℃水浴孵化2h;再用超速离心机35000g/min、4℃离心10 min。取上清0.1ml加2.9ml反应液(0.167mg/ml邻联茴香胺的PBS和0.0005% H2O2)保持温度25℃,使用分光光度计(波长460nm)测量30s和90s的吸光度(A)值。 MPO活性(u/g湿组织)=△A×(13.5)。△A是460nm条件下30s到90s吸收率的变化。系数13.5由经验确定。(1uMPO活性是减少1μmol过氧化物/min所需酶量)。  

    1.7  统计学分析  所有计量数据用均数±标准差(x±s)表示,并进行t检验

    2  结果

    2.1  病理学检查    实验组肺组织轻度水肿,血管丰富,肺实质局部可见少量出血,血管及支气管周围可见大量炎性细胞浸润,包括白细胞(主要为中性粒细胞)、巨噬细胞及少量淋巴细胞。

    2.2  肺组织MPO含量  各实验组肺组织MPO含量较对照组升高,组间有明显差异(P<0.01)。  各组MPO含量变化见表1。 表1  各组肺组织MPO含量注:与对照组相比*P<0.01;与胎粪液组相比**P<0.01

    3  讨论

    羊水栓塞的病理生理是以肺血管痉挛、呼吸循环衰竭及DIC为先导的多器官功能衰竭综合征。尽管发生率低,但是死亡率却高达60%~80%[2,3]。以前认为栓塞是主要的病因,现在认为羊水进入母体内后激发内源性介质的释放是整个过程的关键。从发病机制上来说,认为在某种程度上羊水栓塞的临床症状从血流动力学及血液学上与过敏性休克和中毒性休克极为相似。但目前认为,AFE并不是IgE参与的I型变态应[4]。Michael等认为AFE的发病机制可能是无抗体参加的过敏样反应,并将AFE称之为“妊娠过敏样综合征”。在此反应中异体物质引起肥大细胞脱颗粒,异常的花生四烯酸代谢产物产生,包括白三烯、前列腺素、血栓素等进入母体血循环引起一系列严重的病理生理变化[5]。研究证实这些递质引起的过敏反应和败血症反应的确与羊水栓塞综合征的临床症状和凝血机制紊乱直接相关,也可以说羊水栓塞综合征事实上是一种类过敏反应综合征。

    髓过氧化物酶(Myeloperoxidase, MPO)存在于中性粒细胞(PMN)的嗜天青颗粒中,PMN激活时部分MPO可以释放,因此MPO可作为中性粒细胞的标志物,敏感地反映出组织中性粒细胞浸润的程度[4]。笔者测定羊水栓塞后的动物肺组织MPO的变化,胎粪液组升高明显,说明除了胎粪液内含有的有形成分造成机械栓塞外导致较多的中性粒细胞浸润外,羊水栓塞中大量的补体被激活、消耗,其活化裂解产生的片段C5a是很强的白细胞趋化因子[6],它可募集激活白细胞,导致白细胞的浸润聚集以损伤肺组织,本实验已经证实了这一点。在病理切片观察中,笔者发现了多量的巨噬细胞及中性粒细胞,这些结果提示,炎性反应参与了羊水栓塞造成的肺损伤,推测不仅混浊羊水栓子对循环中的中性粒细胞有化学趋向的作用,而且补体被激活后募集激活白细胞至肺内,进而肺中性粒细胞衍生的氧化剂及蛋白酶引起肺微血管损伤。白细胞向各个器官的实质细胞浸润,同时在局部通过呼吸爆发产生氧自由基,并释放溶酶体酶、前列腺酶、白三烯和PAF等多种炎症介质,引起各生命器官毛细血管内皮细胞损伤、通透性增高,导致实质细胞损伤,从而引起临床症状。

【参考文献】
  1 Michael D,Benson MD,Richard K,et al.Immunologic studies in presumed amniotic fluid embolism. Obstet Gynecol,2001, 97: 510-514.

2 Clark SL, Hankins GD, Duldley DA, et al. Amniotic fluid embolism: analysis of the national registry. Am J Obstet Gynecol,1995,172:1158.

3 Burrows A, Khoo SK. The amniotic fluid embolism syndrome: 10 years experience at a major teaching hospital. Aust New Ireland J Obstet Gynecol,1995,35:245.

4 Benson MD. Anaphylactoid syndrome of pregnancy [letter].Am J Obstet Gynecol,1996,175:749.

5 Benson MD,Lindberg RE. Amniotic fluid embolism, anaphylaxis and tryptase.Am J Obstet Gynecol,1996,175:737.

6 Fernandez HN, Henson PM, Oranl A, et al. Chemotacticresponse to human C3a and anaphylatoxins evaluation of C3a and C5a leukotaxis in vitro and under simulated in vivo conditions. J Immunol, 1978,120:109-115.


作者单位:1 163453 黑龙江大庆,大庆油田总医院集团龙岗社区卫生服务中心 2 163001 黑龙江大庆,大庆油田总医院集团龙南医院妇产科



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