human CA72-4 ELISA KITL5E100796人份/盒 | 生物诊断试剂 | 上海领潮生物科技有限公司

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产品名称：human CA72-4 ELISA KIT
产品型号：L5E1007
产地：China
制造商：上海领潮生物科技有限公司
产品规格：96人份/盒
产品报价：1600RMB 元(人民币) / PCS
关注度：103 次 [产品手册下载]
供应商：上海领潮生物科技有限公司
公司位于：上海市市辖区
备注:本信息仅针对企事业单位，不对个人用户适用

产品介绍

详细介绍：

糖链抗原72-4（CA72-4）酶联免疫分析试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供体外研究使用

产品货号：L5E1007

预期应用

ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中糖链抗原72-4（CA72-4）的浓度，适用于结肠癌患者、胰腺癌患者、胃癌患者等的病程和疗效监测。

概述

糖类抗原72-4（Carbohydrate Antigen72-4，CA72-4）是由美国国立癌症研究所（National Cancer Institute， NCI）于1981年从乳癌的肝转移灶中发现的肿瘤相关糖蛋白，相对分子量>1000KD，属于粘蛋白类癌胚胎抗原。组织化学研究证明，它存在于50%的乳腺癌组织和85%~95%的结肠、胰腺、胃、肺及卵巢的肿瘤中。

CA72-4对胃癌有较高的敏感性，阳性率约为65%~70%，在转移性胃癌中阳性率更高，敏感性达43.7%~94%。高于CA72-4和CEA。在病程不同分期及与肿瘤的浸润和淋巴结的转移过程中，CA72-4比CA72-4更有意义，与病程的临床分期呈正相关。不同病理类型的胃癌患者，其阳性率不同，其中以末、低分化胃癌患者最高，为72%，浸润伴随转移者为71.4%，中、高分化癌为63%，CA72-4对胃癌尤其是较为早期或恶性程度较高的胃癌诊断阳性率要高于其他肿瘤标志物指标。

CA72-4在结/直肠癌中与CEA联用、胰腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌及卵巢患者血清中也有一定的阳性率。CA72-4还可以作为治疗后随诊的指标，以及复发后愈后的判断。

实验原理

用纯化的CA72-4抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗CA72-4抗体的微孔中依次加入标本或标准品、HRP标记的抗CA72-4抗体，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的CA72-4含量呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1. 酶联板：一块（96孔）

2. 标准品：6瓶，0.5ml/瓶。CA72-4浓度分别为0 U/ml，11 U/ml，33 U/ml，100 U/ml，300 U/ml，600 U/ml。

3. HRP标记的抗CA72-4抗体：1×10ml/瓶。

4. TMB显色液：1×10ml/瓶。

5. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。

6. 终止液：1×5ml/瓶（2N H₂SO4）。

标本的采集及保存

1. 血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于5000 x g离心5分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2. 血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2 - 8° C 5000 x g离心5分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3. 细胞培养物上清或其它生物标本：请5000 x g离心5分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不应超过3个月，-80℃不应超过6个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测；高血脂的标本不需进行特殊处理，可直接检测。

操作步骤

实验开始前，请提前配制好所有试剂；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，均应用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂盒的检测范围。

1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液40ul，余孔分别加标准品或待测样品40ul，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应1小时。

为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2. 弃去液体，洗涤五次，拍干。每孔加HRP标记的抗CA72-4抗体100ul，37℃, 1小时。

3. 温育后，弃去孔内液体，拍干，洗板5次，拍干。

4. 每孔加显色工作液100ul，37℃避光显色，15分钟。

5. 依序每孔加终止溶液50ul，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

6. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。

注：

1. 每次实验留一孔作为空白调零孔（不同于空白孔），该孔不加任何试剂，只是最后加底物溶液即显色液及2N H₂SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

2. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温。使用后立即冷藏保存试剂。

3. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入HRP标记抗体溶液或底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，洗板拍干后请立即加入后步试剂，应避免微孔干燥掉。

4. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

5. 在储存和温育时避免强光直接照射。

6. 未使用完的酶标板或者试剂，请于2-8℃保存。HRP标记抗体工作液、显色液工作液请依据所需的量配置使用。标准品需要重复使用时，请按需要量分装，于-20度冰箱保存。请勿重复使用HRP标记抗体工作液、显色液工作液等。

7. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水

纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟，根据需

要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

特异性

本试剂盒可同时检测重组或天然的糖链抗原72-4（CA72-4）。

计算

以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上绘出标准曲线（推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如curve expert 1.3），根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。